Tack för att du besöker nature.com. Webbläsarversionen du använder har begränsat CSS-stöd. För bästa upplevelse rekommenderar vi att du använder den senaste webbläsarversionen (eller att du stänger av kompatibilitetsläget i Internet Explorer). För att säkerställa fortsatt stöd kommer den här webbplatsen dessutom inte att innehålla stilar eller JavaScript.
Melamin är en erkänd livsmedelsförorening som kan förekomma i vissa livsmedelskategorier, både oavsiktligt och avsiktligt. Syftet med denna studie var att verifiera detektion och kvantifiering av melamin i modersmjölksersättning och mjölkpulver. Totalt 40 kommersiellt tillgängliga livsmedelsprover, inklusive modersmjölksersättning och mjölkpulver, från olika regioner i Iran analyserades. Det ungefärliga melamininnehållet i proverna bestämdes med hjälp av ett högpresterande vätskekromatografi-ultraviolett (HPLC-UV) system. En kalibreringskurva (R2 = 0,9925) konstruerades för detektion av melamin i intervallet 0,1–1,2 μg mL⁻¹. Kvantifierings- och detektionsgränserna var 1 μg mL⁻¹ respektive 3 μg mL⁻¹. Melamin testades i modersmjölksersättning och mjölkpulver och resultaten visade att melaminnivåerna i modersmjölksersättnings- och mjölkpulverproverna var 0,001–0,095 mg kg⁻¹ respektive 0,001–0,004 mg kg⁻¹. Dessa värden överensstämmer med EU-lagstiftningen och Codex Alimentarius. Det är viktigt att notera att konsumtionen av dessa mjölkprodukter med reducerat melamininnehåll inte utgör någon betydande risk för konsumenternas hälsa. Detta stöds också av resultaten av riskbedömningen.
Melamin är en organisk förening med molekylformeln C3H6N6, utvunnen från cyanamid. Den har mycket låg löslighet i vatten och är cirka 66 % kväve. Melamin är en allmänt använd industriell förening med ett brett spektrum av legitima användningsområden vid produktion av plast, gödningsmedel och livsmedelsbearbetningsutrustning (inklusive livsmedelsförpackningar och köksredskap)1,2. Melamin används också som läkemedelsbärare för behandling av sjukdomar. Den höga andelen kväve i melamin kan leda till felaktig användning av föreningen och att livsmedelsingredienser får proteinmolekylers egenskaper3,4. Därför ökar tillsats av melamin till livsmedelsprodukter, inklusive mejeriprodukter, kvävehalten. Således drogs den felaktiga slutsatsen att proteinhalten i mjölk var högre än den faktiskt var.
För varje gram melamin som tillsätts ökar proteinhalten i livsmedel med 0,4 %. Melamin är dock mycket lösligt i vatten och kan orsaka allvarligare skador. Att tillsätta 1,3 gram melamin till flytande produkter som mjölk kan öka mjölkens proteinhalt med 30 %5,6. Även om melamin tillsätts i animaliska och till och med mänskliga livsmedel för att öka proteinhalten7, har Codex Alimentarius-kommissionen (CAC) och nationella myndigheter inte godkänt melamin som livsmedelstillsats och har listat det som farligt vid förtäring, inandning eller absorption genom huden. År 2012 listade Världshälsoorganisationens (WHO) internationella byrå för cancerforskning melamin som ett cancerframkallande ämne i klass 2B eftersom det kan vara skadligt för människors hälsa8. Långvarig exponering för melamin kan orsaka cancer eller njurskador2. Melamin i livsmedel kan bilda komplex med cyanursyra för att bilda vattenolösliga gula kristaller som kan orsaka skador på njur- och urinblåsevävnad, samt urinvägscancer och viktminskning9,10. Det kan orsaka akut matförgiftning och, i höga koncentrationer, dödsfall, särskilt hos spädbarn och små barn.11 Världshälsoorganisationen (WHO) har också satt det tolererbara dagliga intaget (TDI) av melamin för människor till 0,2 mg/kg kroppsvikt per dag baserat på CAC:s riktlinjer.12 Den amerikanska livsmedels- och läkemedelsmyndigheten (FDA) har satt den maximala resthalten för melamin till 1 mg/kg i modersmjölksersättning och 2,5 mg/kg i andra livsmedel.2,7 I september 2008 rapporterades det att flera inhemska tillverkare av modersmjölksersättning hade tillsatt melamin i mjölkpulver för att öka proteininnehållet i sina produkter, vilket resulterade i mjölkpulverförgiftning och utlöste en landsomfattande melaminförgiftningsincident som gjorde fler än 294 000 barn sjuka och fler än 50 000 inlagda på sjukhus.13
Amning är inte alltid möjligt på grund av olika faktorer, såsom svårigheter i stadslivet eller sjukdom hos modern eller barnet, vilket leder till att modersmjölksersättning används för att mata spädbarn. Som ett resultat har fabriker etablerats för att producera modersmjölksersättning som är så lik bröstmjölk som möjligt i sammansättning14. Modersmjölksersättning som säljs på marknaden är vanligtvis gjord av komjölk och tillverkas vanligtvis med en speciell blandning av fetter, proteiner, kolhydrater, vitaminer, mineraler och andra föreningar. För att vara nära bröstmjölk varierar protein- och fettinnehållet i modersmjölksersättningen, och beroende på mjölktyp berikas den med föreningar som vitaminer och mineraler som järn15. Eftersom spädbarn är en känslig grupp och det finns risk för förgiftning är säkerheten vid konsumtion av mjölkpulver av avgörande betydelse för hälsan. Efter fallet med melaminförgiftning bland kinesiska spädbarn har länder runt om i världen ägnat stor uppmärksamhet åt denna fråga, och känsligheten inom detta område har också ökat. Därför är det särskilt viktigt att stärka kontrollen av modersmjölksersättningsproduktionen för att skydda spädbarns hälsa. Det finns olika metoder för att detektera melamin i livsmedel, inklusive högpresterande vätskekromatografi (HPLC), elektrofores, sensorisk metod, spektrofotometri och enzymlänkad immunosorbentanalys med antigen-antikropp16. År 2007 utvecklade och publicerade den amerikanska läkemedelsmyndigheten (FDA) en HPLC-metod för bestämning av melamin och cyanursyra i livsmedel, vilket är den mest effektiva metoden för att bestämma melamininnehåll17.
Melaminkoncentrationer i modersmjölksersättning mätt med en ny infrarödspektroskopiteknik varierade från 0,33 till 0,96 milligram per kilogram (mg kg-1). 18 En studie i Sri Lanka fann att melaminnivåerna i helmjölkspulver varierade från 0,39 till 0,84 mg kg-1. Dessutom innehöll importerade modersmjölksersättningsprover de högsta halterna av melamin, 0,96 respektive 0,94 mg/kg. Dessa nivåer ligger under den lagstadgade gränsen (1 mg/kg), men ett övervakningsprogram behövs för konsumentsäkerheten. 19
Flera studier har undersökt halterna av melamin i iransk modersmjölksersättning. Cirka 65 % av proverna innehöll melamin, med ett genomsnitt på 0,73 mg/kg och ett maximalt 3,63 mg/kg. En annan studie rapporterade att halten av melamin i modersmjölksersättning varierade från 0,35 till 3,40 μg/kg, med ett genomsnitt på 1,38 μg/kg. Sammantaget har förekomsten och halten av melamin i iransk modersmjölksersättning utvärderats i olika studier, där vissa prover som innehåller melamin överstiger den maximala gräns som fastställts av tillsynsmyndigheterna (2,5 mg/kg/foder).
Med tanke på den enorma direkta och indirekta konsumtionen av mjölkpulver inom livsmedelsindustrin och den särskilda betydelsen av modersmjölksersättning för barnmat, syftade denna studie till att validera detektionsmetoden för melamin i mjölkpulver och modersmjölksersättning. Faktum är att det första målet med denna studie var att utveckla en snabb, enkel och noggrann kvantitativ metod för att detektera melaminförfalskning i modersmjölksersättning och mjölkpulver med hjälp av högpresterande vätskekromatografi (HPLC) och ultraviolett (UV) detektion. För det andra var syftet med denna studie att bestämma melaminhalten i modersmjölksersättning och mjölkpulver som säljs på den iranska marknaden.
Instrumenten som används för melaminanalys varierar beroende på livsmedelsproduktionsplatsen. En känslig och tillförlitlig HPLC-UV-analysmetod användes för att mäta melaminrester i mjölk och modersmjölksersättning. Mejeriprodukter innehåller olika proteiner och fetter som kan störa melaminmätningen. Därför, som noterats av Sun et al. 22, är en lämplig och effektiv saneringsstrategi nödvändig före instrumentell analys. I denna studie använde vi engångsfilter för sprutor. I denna studie använde vi en C18-kolonn för att separera melamin i modersmjölksersättning och mjölkpulver. Figur 1 visar kromatogrammet för melamindetektion. Dessutom varierade utbytet av proverna innehållande 0,1–1,2 mg/kg melamin från 95 % till 109 %, regressionsekvationen var y = 1,2487x − 0,005 (r = 0,9925) och de relativa standardavvikelsevärdena (RSD) varierade från 0,8 till 2 %. Tillgängliga data indikerar att metoden är tillförlitlig i det studerade koncentrationsområdet (tabell 1). Den instrumentella detektionsgränsen (LOD) och kvantifieringsgränsen (LOQ) för melamin var 1 μg mL⁻¹ respektive 3 μg mL⁻¹. Dessutom uppvisade melamins UV-spektrum ett absorptionsband vid 242 nm. Detektionsmetoden är känslig, tillförlitlig och noggrann. Denna metod kan användas för rutinmässig bestämning av melaminnivån.
Liknande resultat har publicerats av flera författare. En högpresterande vätskekromatografi-fotodiodmatris (HPLC)-metod utvecklades för analys av melamin i mejeriprodukter. De nedre kvantifieringsgränserna var 340 μg kg−1 för mjölkpulver och 280 μg kg−1 för modersmjölksersättning vid 240 nm. Filazzi et al. (2012) rapporterade att melamin inte detekterades i modersmjölksersättning med HPLC. Emellertid innehöll 8 % av mjölkpulverproverna melamin i en halt av 0,505–0,86 mg/kg. Tittlemiet et al.23 genomförde en liknande studie och fastställde melaminhalten i modersmjölksersättning (provnummer: 72) med högpresterande vätskekromatografi-masspektrometri/MS (HPLC-MS/MS) till cirka 0,0431–0,346 mg kg−1. I en studie utförd av Venkatasamy et al. (2010) användes en grön kemimetod (utan acetonitril) och omvänd fas högpresterande vätskekromatografi (RP-HPLC) för att uppskatta melamin i modersmjölksersättning och mjölk. Provets koncentrationsintervall låg från 1,0 till 80 g/ml och responsen var linjär (r > 0,999). Metoden visade utbyten på 97,2–101,2 över koncentrationsintervallet 5–40 g/ml och reproducerbarheten var mindre än 1,0 % relativ standardavvikelse. Dessutom var den observerade LOD och LOQ 0,1 g mL⁻¹ respektive 0,2 g mL⁻¹²⁴. Lutter et al. (2011) fastställde melaminkontaminering i komjölk och mjölkbaserad modersmjölksersättning med hjälp av HPLC-UV. Melaminkoncentrationerna varierade från < 0,2 till 2,52 mg kg⁻¹. Det linjära dynamiska området för HPLC-UV-metoden var 0,05 till 2,5 mg kg−1 för komjölk, 0,13 till 6,25 mg kg−1 för modersmjölksersättning med en proteinmassfraktion på <15 % och 0,25 till 12,5 mg kg−1 för modersmjölksersättning med en proteinmassfraktion på 15 %. LOD- och LOQ-resultaten var 0,03 mg kg−1 (0,09 mg kg−1) för komjölk, 0,06 mg kg−1 (0,18 mg kg−1) för modersmjölksersättning <15 % protein och 0,12 mg kg−1 (0,36 mg kg−1) för modersmjölksersättning med 15 % protein, med ett signal-brusförhållande på 3 respektive 1025 för LOD respektive LOQ. Diebes et al. (2012) undersökte melaminnivåer i modersmjölksersättnings- och mjölkpulverprover med hjälp av HPLC/DMD. I modersmjölksersättning var de lägsta och högsta nivåerna 9,49 mg kg−1 respektive 258 mg kg−1. Detektionsgränsen (LOD) var 0,05 mg kg−1.
Javaid et al. rapporterade att melaminrester i modersmjölksersättning låg i intervallet 0,002–2 mg kg−1 med Fouriertransform infrarödspektroskopi (FT-MIR) (LOD = 1 mg kg−1; LOQ = 3,5 mg kg−1). Rezai et al.27 föreslog en HPLC-DDA (λ = 220 nm) metod för att uppskatta melamin och uppnådde en LOQ på 0,08 μg mL−1 för mjölkpulver, vilket var lägre än den nivå som erhölls i denna studie. Sun et al. utvecklade en RP-HPLC-DAD för detektion av melamin i flytande mjölk genom fastfasextraktion (SPE). De erhöll en LOD och LOQ på 18 respektive 60 μg kg−128, vilket är känsligare än den aktuella studien. Montesano et al. bekräftade effektiviteten av HPLC-DMD-metoden för bedömning av melamininnehåll i proteintillskott med en kvantifieringsgräns på 0,05–3 mg/kg, vilket var mindre känsligt än metoden som användes i denna studie29.
Analyslaboratorier spelar utan tvekan en viktig roll i att skydda miljön genom att övervaka föroreningar i olika prover. Användningen av ett stort antal reagens och lösningsmedel under analysen kan dock resultera i bildandet av farliga rester. Därför utvecklades grön analytisk kemi (GAC) år 2000 för att minska eller eliminera de negativa effekterna av analytiska procedurer på operatörer och miljön26. Traditionella melamindetektionsmetoder, inklusive kromatografi, elektrofores, kapillärelektrofores och enzymlänkad immunosorbentanalys (ELISA), har använts för att identifiera melamin. Bland de många detekteringsmetoderna har dock elektrokemiska sensorer väckt stor uppmärksamhet på grund av sin utmärkta känslighet, selektivitet, snabba analystid och användarvänliga egenskaper30,31. Grön nanoteknik använder biologiska vägar för att syntetisera nanomaterial, vilket kan minska genereringen av farligt avfall och energiförbrukning och därigenom främja implementeringen av hållbara metoder. Nanokompositer, till exempel tillverkade av miljövänliga material, kan användas i biosensorer för att detektera ämnen som melamin32,33,34.
Studien visar att fastfasmikroextraktion (SPME) används effektivt på grund av dess högre energieffektivitet och hållbarhet jämfört med traditionella extraktionsmetoder. SPME:s miljövänlighet och energieffektivitet gör det till ett utmärkt alternativ till traditionella extraktionsmetoder inom analytisk kemi och ger en mer hållbar och effektiv metod för provberedning35.
År 2013 utvecklade Wu et al. en mycket känslig och selektiv ytplasmonresonans (mini-SPR) biosensor som använder kopplingen mellan melamin och anti-melaminantikroppar för att snabbt detektera melamin i modersmjölksersättning med hjälp av en immunanalys. SPR-biosensorn i kombination med en immunanalys (med melaminkonjugerat bovint serumalbumin) är en lättanvänd och billig teknik med en detektionsgräns på endast 0,02 μg mL-136.
Nasiri och Abbasian använde en bärbar sensor med hög potential i kombination med grafenoxid-kitosan-kompositer (GOCS) för att detektera melamin i kommersiella prover37. Denna metod visade ultrahög selektivitet, noggrannhet och respons. GOCS-sensorn uppvisade anmärkningsvärd känslighet (239,1 μM−1), ett linjärt intervall på 0,01 till 200 μM, en affinitetskonstant på 1,73 × 104 och en LOD på upp till 10 nM. Dessutom använde en studie utförd av Chandrasekhar et al. år 2024 en miljövänlig och kostnadseffektiv metod. De använde papayaskalextrakt som reduktionsmedel för att syntetisera zinkoxid-nanopartiklar (ZnO-NP) med en miljövänlig metod. Därefter utvecklades en unik mikro-Raman-spektroskopiteknik för bestämning av melamin i modersmjölksersättning. ZnO-NP som härrör från jordbruksavfall har visat potential som ett värdefullt diagnostiskt verktyg och en pålitlig, lågkostnadsteknik för att övervaka och detektera melamin38.
Alizadeh et al. (2024) använde en mycket känslig fluorescensplattform med metallorganiskt ramverk (MOF) för att bestämma melamin i mjölkpulver. Sensorns linjära område och nedre detektionsgräns, bestämda med 3σ/S, var 40 till 396,45 nM (motsvarande 25 μg kg−1 till 0,25 mg kg−1) respektive 40 nM (motsvarande 25 μg kg−1). Detta område ligger långt under de maximala resthalterna (MRL) som fastställts för identifiering av melamin i modersmjölksersättning (1 mg kg−1) och andra livsmedels-/foderprover (2,5 mg kg−1). Fluorescerande sensor (terbium (Tb)@NH2-MIL-253(Al)MOF) uppvisade högre noggrannhet och mer exakt mätförmåga än HPLC39 vid detektion av melamin i mjölkpulver. Biosensorer och nanokompositer inom grön kemi förbättrar inte bara detektionsmöjligheterna utan minimerar också miljörisker i linje med principer för hållbar utveckling.
Principer för grön kemi har tillämpats på olika metoder för bestämning av melamin. Ett tillvägagångssätt är utvecklingen av en grön dispersiv fastfas-mikroextraktionsmetod med användning av den naturliga polära polymeren β-cyklodextrin tvärbunden med citronsyra för effektiv extraktion av melamin 40 från prover som modersmjölksersättning och varmt vatten. En annan metod använder Mannich-reaktionen för bestämning av melamin i mjölkprover. Denna metod är billig, miljövänlig och mycket noggrann med ett linjärt intervall på 0,1–2,5 ppm och en låg detektionsgräns 41. Dessutom utvecklades en kostnadseffektiv och miljövänlig metod för kvantitativ bestämning av melamin i flytande mjölk och modersmjölksersättning med hjälp av Fouriertransform infraröd transmissionsspektroskopi med hög noggrannhet och detektionsgränser på 1 ppm respektive 3,5 ppm 42. Dessa metoder demonstrerar tillämpningen av principer för grön kemi på utvecklingen av effektiva och hållbara metoder för bestämning av melamin.
Flera studier har föreslagit innovativa metoder för melamindetektion, såsom användning av fastfasextraktion och högpresterande vätskekromatografi (HPLC)43, samt snabb högpresterande vätskekromatografi (HPLC), som inte kräver komplex förbehandling eller jonparreagens, vilket minskar mängden kemiskt avfall44. Dessa metoder ger inte bara noggranna resultat för bestämning av melamin i mejeriprodukter, utan följer också principerna för grön kemi, minimerar användningen av farliga kemikalier och minskar den totala miljöpåverkan av analysprocessen.
Fyrtio prover av olika märken testades i tre exemplar, och resultaten presenteras i tabell 2. Melaminhalterna i modersmjölksersättningen och mjölkpulverproverna varierade från 0,001 till 0,004 mg/kg respektive från 0,001 till 0,095 mg/kg. Inga signifikanta förändringar observerades mellan de tre åldersgrupperna för modersmjölksersättning. Dessutom detekterades melamin i 80 % av mjölkpulvret, men 65 % av modersmjölksersättningen var kontaminerad med melamin.
Melaminhalten i industriellt mjölkpulver var högre än i modersmjölksersättning, och skillnaden var signifikant (p < 0,05) (Figur 2).
De erhållna resultaten låg under de gränsvärden som satts av FDA (under 1 och 2,5 mg/kg). Dessutom är resultaten i linje med de gränsvärden som satts av CAC (2010) och EU45,46, dvs. den maximalt tillåtna gränsen är 1 mg kg-1 för modersmjölksersättning och 2,5 mg kg-1 för mejeriprodukter.
Enligt en studie från 2023 av Ghanati et al.47 varierade melaminhalten i olika typer av förpackad mjölk i Iran från 50,7 till 790 μg kg−1. Deras resultat låg under FDA:s tillåtna gränsvärde. Våra resultat är lägre än Shoder et al.48 och Rima et al.49. Shoder et al. (2010) fann att melaminhalterna i mjölkpulver (n=49) bestämda med ELISA låg mellan 0,5 och 5,5 mg/kg. Rima et al. analyserade melaminrester i mjölkpulver med fluorescensspektrofotometri och fann att melaminhalten i mjölkpulver var 0,72–5,76 mg/kg. En studie genomfördes i Kanada 2011 för att övervaka melaminhalterna i modersmjölksersättning (n=94) med hjälp av vätskekromatografi (LC/MS). Melaminkoncentrationerna befanns ligga under den acceptabla gränsen (preliminär standard: 0,5 mg kg−1). Det är osannolikt att de bedrägliga melaminnivåerna som upptäcktes var en taktik som användes för att öka proteininnehållet. Det kan dock inte förklaras med användning av gödningsmedel, flyttning av behållarens innehåll eller liknande faktorer. Dessutom avslöjades inte källan till melamin i mjölkpulver som importerats till Kanada50.
Hassani et al. mätte melaminhalten i mjölkpulver och flytande mjölk på den iranska marknaden 2013 och fann liknande resultat. Resultaten visade att förutom ett märke av mjölkpulver och flytande mjölk var alla andra prover kontaminerade med melamin, med halter från 1,50 till 30,32 μg g−1 i mjölkpulver och 0,11 till 1,48 μg ml−1 i mjölk. Det är värt att notera att cyanursyra inte detekterades i något av proverna, vilket minskade risken för melaminförgiftning för konsumenter. 51 Tidigare studier har bedömt melaminkoncentrationen i chokladprodukter som innehåller mjölkpulver. Cirka 94 % av de importerade proverna och 77 % av de iranska proverna innehöll melamin. Melaminhalterna i importerade prover varierade från 0,032 till 2,692 mg/kg, medan de i iranska prover varierade från 0,013 till 2 600 mg/kg. Sammantaget detekterades melamin i 85 % av proverna, men endast ett specifikt märke hade halter över den tillåtna gränsen.44 Tittlemier et al. rapporterade melaminhalter i mjölkpulver som varierade från 0,00528 till 0,0122 mg/kg.
Tabell 3 sammanfattar resultaten av riskbedömningen för de tre åldersgrupperna. Risken var mindre än 1 i alla åldersgrupper. Det finns således ingen icke-cancerframkallande hälsorisk från melamin i modersmjölksersättning.
Lägre nivåer av kontaminering i mejeriprodukter kan bero på oavsiktlig kontaminering under tillagningen, medan högre nivåer kan bero på avsiktliga tillsatser. Dessutom anses den totala risken för människors hälsa vid konsumtion av mejeriprodukter med låga melaminnivåer vara låg. Man kan dra slutsatsen att konsumtion av produkter som innehåller så låga halter av melamin inte utgör någon risk för konsumenternas hälsa52.
Med tanke på vikten av livsmedelssäkerhetshantering inom mejeriindustrin, särskilt när det gäller att skydda folkhälsan, är det av yttersta vikt att utveckla och validera en metod för att bedöma och jämföra melaminnivåer och rester i mjölkpulver och modersmjölksersättning. En enkel och noggrann HPLC-UV-spektrofotometrisk metod utvecklades för bestämning av melamin i modersmjölksersättning och mjölkpulver. Metoden validerades för att säkerställa dess tillförlitlighet och noggrannhet. Metodens detektions- och kvantifieringsgränser visade sig vara tillräckligt känsliga för att mäta melaminnivåer i modersmjölksersättning och mjölkpulver. Enligt våra data detekterades melamin i de flesta av de iranska proverna. Alla detekterade melaminnivåer låg under de maximalt tillåtna gränserna som fastställts av CAC, vilket indikerar att konsumtion av dessa typer av mejeriprodukter inte utgör någon risk för människors hälsa.
Alla kemiska reagens som användes var av analytisk kvalitet: melamin (2,4,6-triamino-1,3,5-triazin) 99 % ren (Sigma-Aldrich, St. Louis, MO); acetonitril av HPLC-kvalitet (Merck, Darmstadt, Tyskland); ultrarent vatten (Millipore, Morfheim, Frankrike). Engångssprutfilter (Chromafil Xtra PVDF-45/25, porstorlek 0,45 μm, membrandiameter 25 mm) (Macherey-Nagel, Düren, Tyskland).
Ett ultraljudsbad (Elma, Tyskland), en centrifug (Beckman Coulter, Krefeld, Tyskland) och HPLC (KNAUER, Tyskland) användes för att framställa proverna.
En högpresterande vätskekromatograf (KNAUER, Tyskland) utrustad med en UV-detektor användes. HPLC-analysförhållandena var följande: ett UHPLC Ultimate-system utrustat med en ODS-3 C18 analytisk kolonn (4,6 mm × 250 mm, partikelstorlek 5 μm) (MZ, Tyskland) användes. HPLC-eluenten (mobil fas) var en TFA/metanolblandning (450:50 ml) med en flödeshastighet på 1 ml min-1. Detektionsvåglängden var 242 nm. Injektionsvolymen var 100 μL, kolonntemperaturen var 20 °C. Eftersom läkemedlets retentionstid är lång (15 minuter) bör nästa injektion göras efter 25 minuter. Melamin identifierades genom att jämföra retentionstiden och UV-spektrumtoppen för melaminstandarder.
En standardlösning av melamin (10 μg/ml) framställdes med vatten och förvarades i kylskåp (4 °C) skyddat från ljus. Späd stamlösningen med den mobila fasen och framställ arbetsstandardlösningar. Varje standardlösning injicerades i HPLC:n 7 gånger. Kalibreringsekvation 10 beräknades genom regressionsanalys av den bestämda topparean och den bestämda koncentrationen.
Kommersiellt tillgängligt komjölkspulver (20 prover) och prover av olika märken av komjölksbaserad modersmjölksersättning (20 prover) köptes från lokala stormarknader och apotek i Iran för att mata spädbarn i olika åldersgrupper (0–6 månader, 6–12 månader och >12 månader) och förvarades i kyltemperatur (4 °C) fram till analys. Därefter vägdes 1 ± 0,01 g homogeniserat mjölkpulver och blandades med acetonitril:vatten (50:50, v/v; 5 ml). Blandningen omrördes i 1 minut, sonikerades sedan i ett ultraljudsbad i 30 minuter och skakades slutligen i 1 minut. Blandningen centrifugerades sedan vid 9000 × g i 10 minuter vid rumstemperatur och supernatanten filtrerades ner i en 2 ml autosamplerflaska med hjälp av ett 0,45 μm sprutfilter. Filtratet (250 μl) blandades sedan med vatten (750 μl) och injicerades i HPLC-systemet10,42.
För att validera metoden bestämde vi återvinning, noggrannhet, detektionsgräns (LOD), kvantifieringsgräns (LOQ) och precision under optimala förhållanden. LOD definierades som provinnehållet med en topphöjd tre gånger baslinjebrusnivån. Å andra sidan definierades provinnehållet med en topphöjd 10 gånger signal-brusförhållandet som LOQ.
Enhetens respons bestämdes med hjälp av en kalibreringskurva bestående av sju datapunkter. Olika melaminhalter användes (0, 0,2, 0,3, 0,5, 0,8, 1 och 1,2). Lineariteten hos melaminberäkningsproceduren bestämdes. Dessutom tillsattes flera olika nivåer av melamin till blindproverna. Kalibreringskurvan konstruerades genom kontinuerlig injicering av 0,1–1,2 μg mL−1 av en standardmelaminlösning i modersmjölksersättning och mjölkpulverprover och dess R2 = 0,9925. Noggrannheten bedömdes genom procedurens repeterbarhet och reproducerbarhet och uppnåddes genom att injicera prover under den första och tre efterföljande dagar (i triplikat). Metodens repeterbarhet bedömdes genom att beräkna RSD-% för tre olika koncentrationer av tillsatt melamin. Återvinningsstudier utfördes för att bestämma precisionen. Återvinningsgraden med extraktionsmetoden beräknades vid tre nivåer av melaminkoncentration (0,1, 1,2, 2) i prover av modersmjölksersättning och torrmjölk9,11,15.
Beräknat dagligt intag (EDI) bestämdes med följande formel: EDI = Ci × Cc/BW.
Där Ci är den genomsnittliga melaminhalten, Cc är mjölkkonsumtionen och BW är barnens genomsnittliga vikt.
Dataanalys utfördes med SPSS 24. Normalitet testades med Kolmogorov-Smirnov-testet; alla data var icke-parametriska tester (p = 0). Därför användes Kruskal-Wallis-testet och Mann-Whitney-testet för att fastställa signifikanta skillnader mellan grupperna.
Ingelfinger, Jr. Melamin och dess inverkan på global livsmedelsförorening. New England Journal of Medicine 359(26), 2745–2748 (2008).
Lynch, RA, et al. Effekt av pH på melaminmigration i barns skålar. International Journal of Food Contamination, 2, 1–8 (2015).
Barrett, MP och Gilbert, IH Riktning av giftiga föreningar mot trypanosomers inre. Progress in Parasitology 63, 125–183 (2006).
Nirman, MF, et al. In vitro- och in vivo-utvärdering av melamindendrimerer som läkemedelsleveransvehiklar. International Journal of Pharmacy, 281(1–2), 129–132(2004).
Världshälsoorganisationen. Expertmöten 1–4 för att granska de toxikologiska aspekterna av melamin och cyanursyra (2008).
Howe, AK-C., Kwan, TH och Lee, PK-T. Melamintoxicitet och njuren. Journal of the American Society of Nephrology 20(2), 245–250 (2009).
Ozturk, S. och Demir, N. Utveckling av ett nytt IMAC-adsorbent för identifiering av melamin i mejeriprodukter genom högpresterande vätskekromatografi (HPLC). Journal of Food Synthesis and Analysis 100, 103931 (2021).
Chansuvarn, V., Panic, S. och Imim, A. Enkel spektrofotometrisk bestämning av melamin i flytande mjölk baserad på Mannich-grön reaktion. Spectrochem. Acta Part A Mol. Biomol. Spectrosc. 113, 154–158 (2013).
Deabes, M. och El-Habib, R. Bestämning av melamin i modersmjölksersättning, mjölkpulver och pangasiusprover genom HPLC/diodmatriskromatografi. Journal of Environmental Analytical Toxicology, 2(137), 2161–0525.1000137 (2012).
Skinner, KG, Thomas, JD, och Osterloh, JD Melamintoxicitet. Journal of Medical Toxicology, 6, 50–55 (2010).
Världshälsoorganisationen (WHO), Toxikologi och hälsoaspekter av melamin och cyanursyra: Rapport från ett WHO/FAO-samarbetsexpertmöte med stöd av Health Canada, Ottawa, Kanada, 1-4 december 2008 (2009).
Korma, SA, et al. Jämförande studie av lipidsammansättning och kvalitet hos modersmjölksersättningspulver innehållande nya funktionella strukturella lipider och kommersiell modersmjölksersättning. European Food Research and Technology 246, 2569–2586 (2020).
El-Waseef, M. och Hashem, H. Förbättring av näringsvärde, kvalitetsegenskaper och hållbarhet hos modersmjölksersättning med palmolja. Middle East Journal of Agricultural Research 6, 274–281 (2017).
Yin, W., et al. Produktion av monoklonala antikroppar mot melamin och utveckling av en indirekt kompetitiv ELISA-metod för detektion av melamin i råmjölk, torrmjölk och djurfoder. Journal of Agricultural and Food Chemistry 58(14), 8152–8157 (2010).